Determinación de un Du.
Introducción:
-En algunos casos los anticuerpos tipo IgG son incapaces de producir la aglutinación de los hematíes. Sin embargo, son capaces de adherirse a su superficie y decimos que han sensibilizado a los hematíes.
-El suero de Coombs, suero extraído de conegos con anticuerpos IgM humana, puede ser poliespecifico, si está dirigido contra la IgG y contra el componente C3d del complemento o monoespecífico, si está dirigido contra la IgG o contra alguno de los componentes del complento.
Material:
-Tubos de hemólisis.
-Centrífuga.
-Pipetas pasteur.
-Gradilla.
-Baño de agua.
-Reloj.
-Visualizador luminoso.
Reactivos:
-Suero anti-D humano.
-Suero antiglobulila humana (suero de Coombs).
-Suero salino.
Muestra:
-Hematíes de sangre problema previamente lavados y suspendidos a 5%.
Fundamento:
-El test de Coombs puede realizarse de dos maneras:
-Prueba directa: Intentamos detectar anticuerpos incompletos que han sensibilizado a los hematíes, los enfrentamos diréctamente al suero de Coombs y observamos.
-Prueba indirecta: Primero se sensibilizan los hematíes y luego los hacemos reaccionar con el suero de Coombs. Buscamos anticuerpos incompletos libres o poner de manifiesto la presencia de antígenos débiles en la membrana de los hematíes.
Procedimiento:
1. En un tubo de hemólisis vertimos una gota de suero anti-D y una gota de la suspensión de hematíes problema.
2. Mezclamos e incubamos a 37ºC durante 30 minutos.
3. De mientras podemos hacer un control negativo(para evitar falsos positivos), consiste un Coombs directo, se vierte una gota de la suspensión + una gota de suero de Coombs en un tubo de hemólisis, centrifugar a 1000rpm durante 1 minuto y ver los resultados.
4. Una vez incubada la muestra, lavamos la solución con 2ml de suero salino x3 veces a 1000rpm durante 1 minuto.
5. Decantamos el sobrenadante y añadimos una gota de suero de Coombs.
6. Centrifugamos a 1000rpm durante 1 minuto.
7. Leer los resultados.
Lectura de los resultados:
-Si existe aglutinación, el resultado es +, indíca que en la membrana de los hematíes hay antígenos Du y se clasifica la sangre como Rh+ variante Du. Si no existe aglutinación, se considera Rh -.
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