Práctica 45: Determinación sérica del grupo AB0. (PLVII) (B4).

Fecha: 27-4-15

Determinación sérica del grupo AB0.

Introducción:

La clasificación correcta del grupo sanguíneo en la sangre del donante y del receptor es un paso fundamental en el acto transfusional. Por ello, es imprescindible confirmar el resultado de la prueba celular con la determinación sérica del grupo sanguíneo.

Material:

-Tubos de hemólisis(se aprecia mejor la reacción positiva).

-Pipetas pasteur.

-Baño de agua.

-Centrífuga.

-Reloj.

-Rotulador de vidrio.

-Gradilla.
-Papel parafilm.
-Visualizador luminoso.

Reactivos:

-Solución de hematíes del grupo A1 al 2%.

-Solución de hematíes del grupo A2 al 2%.

-Solución de hematíes del grupo B al 2%.

-Solución de hematíes del grupo 0 al 2%.

-Solución de hematíes de la sangre problema al 2%.

Muestra:

-Plasma obtenido a 3000rpm durante 10 minutos.(En nuestro caso, fueron 4 sueros diferentes obtenidos por centrifugación de sangre coagulada y, posteriormente lo realizamos con plasma).

Fundamento:

-El suero de un individuo solo debe contener anticuerpos frente a los antígenos que no están presentes en sus propios hematíes. Por ellos, al hacer reaccionar este suero con hematíes conocidos del grupo A y del grupo B, solo producirá aglutinación en el caso de ser enfrentado a eritrocitos con antígenos distintos a los de sus propios hematíes.

Procedimiento:

1. Rotular cuatro tubos de hemólisis: 

-Tubo 1: "A1"

-Tupo 2: "A2"

-Tubo 3: "B"

-Tubo 4: "C"(en este caso, no lo hicimos en clase, ya que el profesor nos proporcionó cuatro "sueros" problema y nosotros debíamos averiguar de que tipo eran cada uno)(Este tubo se utilizará de control negativo).

2. Depositar dos gotas de suero problema (En nuestro caso fue suero obtenido de sangre coagulada) posteriormente incubado a 56ºC durante 10 minutos, en todos los tubos. Si se trata de plasma no se incuba.

3. Añadirles una gota de suero salino a todos los tubos.

4. Mover suavemente los tubos y centrifugar a 1000rpm durante 1 minuto.

5. Golpear el fondo de los tubos con los dedos y observar si hay presencia o no de aglutinación, si hay presencia de aglutinación, significa que el "Plasma/suero" problema ha reaccionado contra los antígenos de la suspensión de hematíes del grupo sanguíneo correspondiente.

Lectura de los resultados:

-El suero problema 1 nos ha salido A2 y teóricamente debería de salir A1.

-El suero problema 2 nos ha salido B, teóricamente debería de salir 0.

-El suero problema 3 nos ha salido A1 y teóricamente debería de salir B.

-El suero problema 4 nos ha salido B, teóricamente debería de salir A2.

-Viendo que los resultados no eran los esperados, debemos buscar el error, un posible error puede ser el de la solución al 2% de hematíes en vez de al 5%.

Práctica 44: Preparación de suspensión de hematíes tipados

Fecha:24-4-15

Preparación de suspensión de hematíes tipados.

Introducción:

-Con esta práctica podremos elaborar suspensiones de hematíes al porcentaje deseado, tras su  lavado, para posteriores pruebas diagnósticas.

Materiales:

-Tubos de centrífuga.

-Gradilla.

-Centrífuga.

-Pipetas pasteur.

-Rotulador de vidrio.

Reactivos:

-Suero salino 0,9%.

Muestra:

-Sangre total anticoagulada.

Fundamento:

-Con esta práctica podremos elaborar suspensiones de hematíes al porcentaje deseado, tras su  lavado, para posteriores pruebas diagnósticas.

Procedimiento:

1. Tomar 1ml de sangre de un grupo sanguíneo conocido y completar con 3ml de solución salina.

2. Centrifugar a 2000rpm durante 4 minutos.

3. Retirar el sobrenadante.

4. Repetir dos veces más, en total serán tres lavados.

5. Preparar hematíes al 2% (2 gotas de hematíes + 5ml de suero salino).

6. Realizar el mismo procedimiento con los restantes grupos sanguíneos diferentes.

Práctica 43: Determinación celular en tubo. (PLVI)(B4)

Fecha:23-4-15

Determinación celular en tubo.

Introducción:

-La determinación celular del grupo AB0 puede realizarse mediante una técnica en porta o en tubo, esta será en tubo. En ambos casos, los hematíes problema, se enfrentan con antisueros dirigidos contra esos antigenos. El resultado final consiste en la aglutinación directa o no de los eritrocitos cuando reaccionan contra ese antisuero.

Material:

-Tubos de centrífuga.

-Rotulador de vidrio.

-Pipetas pasteur.

-Centrífuga.

-Gradilla.
-Visualizador luminoso.
-Papel parafilm.

Reactivos:

-Suero salino al 0,9%.

-Suero Anti-A.

-Suero Anti-B.

-Suero Anti-AB.

Muestra:

-Sangre total anticoagulada, un lavado de hematíes.

Fundamento:

-Los hematíes problema contienen las sustancias antigénicas del sistema AB0 y se enfrentan a sueros conocidos que poseen anticuerpos frente a esos antígenos. El resultado final es la presencia o no de aglutinación en los hematíes reaccionantes.

Procedimiento:

1. Vertir 1ml de sangre + 2,5ml de suero salino en un tubo de centrífuga y centrifugar durante 4 minutos a 2000rpm.

2. Desechar el sobrenadante con una pipeta pasteur.

3. Depositar 100microlitros (2 gotas) + 5ml de suero salino y homogenizar, ahi tendremos una suspensión de hematíes al 2%.

4. Depositar una gota de esta mezcla en tres tubos de centrifuga rotulados como "A", "B" y "AB" + dos gotas de su antisuero correspondiente.

5. Centrifugar a 1000rpm durante 1 minuto.

6. Golpeamos suavemente el fondo del tubopara desprender el sedimento, y se observa microscopicamente la presencia o ausencia de aglutinación.

Lectura de los resultados:

-La reacción será negativa si los hematíes se resuspenden homogéneamente, y al contrario, será positiva si se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento.

Encuesta de clase respecto grupos sanguíneos

Práctica 42: Determinación celular en porta. (PLV) (B4).

Fecha: 22-4-15

Determinación celular en porta.

Introducción:

-La determinación celular del grupo AB0 puede realizarse mediante una técnica en porta o en tubo, esta será en porta. En ambos casos, los hematíes problema, se enfrentan con antisueros dirigidos contra esos antigenos. El resultado final consiste en la aglutinación directa o no de los eritrocitos cuando reaccionan contra ese antisuero.

Material:

-Gasas.

-Lancetas.

-Un porta.

-Un reloj (opcional).

-Un rotulador de vidrio.

-Un capilar heparizado (opcional).

-Palillos mezcladores.
-Visualizador luminoso.

Reactivos:

-Alcohol.

-Suero anti-A

-Suero anti-B

-Suero anti-A1

-Suero anti-AB (opcional)

Muestra:

-Sangre capilar o sangre total anticoagulada.

Fundamento:

-Esta práctica consiste en observar la aglutinación de los hematíes enfrentados a una serie de antisueros conocidos y de reconocida eficacia, para determinar el grupo AB0 del individuo.

Procedimiento:

1. Con un rotulador de vidrio, dividir un porta en dos, y señalar en una mitad "A" y en la otra mitad una "B".

2. Depositar una gota de suero anti-A en la zona "A" y una gota de suero anti-B en la zona "B".

3. Desinfectar la zona de la punción y realizar la punción con la lanceta.

4. Depositar una gota de sangre al lado de cada gota de suero y con la ayuda de un palillo, mezclar la sangre con los sueros.

5. Observar si se han producido aglutinaciones.

6. Si se producen aglutinaciones en la zona "A" nuestra sangre problema será del grupo A, ya que el el reactivo de la zona "A" presenta suero-anti A, y si aglutina en la zona "B" ocurre de igual manera.

7. Si no aglutina en ninguna zona, el resultado del grupo de la muestra será 0, y si aglutina en las dos zonas, tan to la zona "A" como la zona "B", la muestra será del grupo sanguíneo AB.

8. Si la muestra da que es A, se puede comprobar si se trata de A1 o de A2, haciendo reaccionar una gota de la sangre problema con un suero-anti-A1(Si aglutina será A1).

Lectura de los resultados:

+=Presencia de aglutinación

-=Ausencia de aglutinación

¡Estamos de vuelta!