Práctica 43: Determinación celular en tubo. (PLVI)(B4)

Fecha:23-4-15

Determinación celular en tubo.

Introducción:

-La determinación celular del grupo AB0 puede realizarse mediante una técnica en porta o en tubo, esta será en tubo. En ambos casos, los hematíes problema, se enfrentan con antisueros dirigidos contra esos antigenos. El resultado final consiste en la aglutinación directa o no de los eritrocitos cuando reaccionan contra ese antisuero.

Material:

-Tubos de centrífuga.

-Rotulador de vidrio.

-Pipetas pasteur.

-Centrífuga.

-Gradilla.
-Visualizador luminoso.
-Papel parafilm.

Reactivos:

-Suero salino al 0,9%.

-Suero Anti-A.

-Suero Anti-B.

-Suero Anti-AB.

Muestra:

-Sangre total anticoagulada, un lavado de hematíes.

Fundamento:

-Los hematíes problema contienen las sustancias antigénicas del sistema AB0 y se enfrentan a sueros conocidos que poseen anticuerpos frente a esos antígenos. El resultado final es la presencia o no de aglutinación en los hematíes reaccionantes.

Procedimiento:

1. Vertir 1ml de sangre + 2,5ml de suero salino en un tubo de centrífuga y centrifugar durante 4 minutos a 2000rpm.

2. Desechar el sobrenadante con una pipeta pasteur.

3. Depositar 100microlitros (2 gotas) + 5ml de suero salino y homogenizar, ahi tendremos una suspensión de hematíes al 2%.

4. Depositar una gota de esta mezcla en tres tubos de centrifuga rotulados como "A", "B" y "AB" + dos gotas de su antisuero correspondiente.

5. Centrifugar a 1000rpm durante 1 minuto.

6. Golpeamos suavemente el fondo del tubopara desprender el sedimento, y se observa microscopicamente la presencia o ausencia de aglutinación.

Lectura de los resultados:

-La reacción será negativa si los hematíes se resuspenden homogéneamente, y al contrario, será positiva si se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento.