Fecha: 5-5-15
Determinación del grupo Rh en tubo.
Introducción:
- Igual que en la prueba en portaobjetos, intentamos poner de manifiesto la presencia de antígeno D en la superficie de los hematíes mediante su enfrentamiento a un suero anti-D.
Material:
-Tubos de hemólisis.
-Rotulador de vidrio.
-Visualizador luminoso.
-Gradilla.
-Pipetas pasteur.
-Vasos de precipitados para desechar.
-Centrífuga.
-Pipeta graduada.
-Papel parafilm.
Reactivos:
-Suero anti-D.
-Albúmina bovina al 30%.
-Solución salina fisiológica al 0,9%.
Muestra:
-Hematíes problema preparados en suspensión al 5% (Pincha aqui para saber como se preparan)
Fundamento:
-La técnica esta basada en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema, empleado como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti-D. En el caso de que los hematíes contengan el antígeno D se producirá una aglutinación que puede observarse a simple vista.
Procedimiento:
1. Preparar la muestra, esto se hace mezclando sangre problema con suero salino a partes iguales, centrifugar a 2000rpm durante cuatro minutos, desechamos el sobrenadante y depositamos suero fisiológico a la misma cantidad de hematíes concentrados, esto se realizar hasta completar tres centrifugados.
2. En un tubo de ensayo depositamos 5ml de suero fisiológico y cinco gotas del concentrado de hematíes, homogenizar y ya tenemos la muestra preparada.
3. Rotulamos dos tubos, un con una "D" y otro con una "A".
4. En el tubo D añadimos una gota de suero anti-D y en el tubo A añadimos una gota de albúmina bovina.
5. A cada tubo le añadimos una gota de la suspensión de hematíes al 5% y agitamos suavemente y tapamos con papel parafilm.
6. Centrifugamos a 1000rpm durante un minuto o 3500rpm durante 30 segundos.
7. Golpeamos suavemente el fondo de los tubos para despegar el botón hemático y observamos la presencia o no de aglutinación.
Lectura de los resultados:
-Si el tubo D presenta aglutinación y el tubo A no, decimos que es Rh positivo.
-Si no se produce aglutinación en ninguno de los dos, se procede a incubar ambos a 37ºC durante media hora y posteriormente centrifugamos a 1000rpm durante 1 minuto, se observa si existe aglutinación o no.
-En caso de persistir la negatividad cromprobaremos que el paciente no posee un Du (D debíl) mediante una prueba de Coombs indirecta.
-Si sigue siendo negativo, la muestra se tratará de Rh negativo.
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