Práctica 48: Determinación del fenotipo y genotipo del sistema Rh. (PLXI)(B4).

Fecha: 7-5-15

Determinación del fenotipo y genotipo del sistema Rh.

Introducción:

-El genotipo de una persona es su dotación genética en el cromosoma, y el fenotipo es la manifestación de ese genotipo. En caso de los sistemas del grupo sanguíneo se puede considerar el fenotipo como la suma total de antígenos detectados en los hematíes mediante el empleo de antisueros específicos.

Material:

- Tubos de hemólisis.

-Visualizador luminoso.

-Papel parafilm.

-Rotulador de vidrio.

-Pipetas pasteur.

-Centrífuga.

-Gradilla.

Reactivos:

-Suero anti-D.

-Suero anti-E.

-Suero anti-C.

-Suero anti-e.

-Suero anti-c.

-Suero fisiológico.

Muestra:

-Suspensión de hematíes lavados al 5% en solución salina.

Fundamento:

-Podemos investigar el genotipo del sistema Rh enfrentando los hematíes problema a distintos antisueros dirigidos contra los antígenos que componen el sistema Rh.

Procedimiento:

1. Rotulamos cinco tubos "D","C","E","c" y "e".

2. En cada tubo echamos una gota de antisuero corrspondiente y una gota de suspensión de hematíes.

3. Centrifugamos a 1000rpm durante 1 minuto.

4. Golpear el fondo de los tubos suavemente y observar la presencia o no de algutinación.

Lectura de los resultados:

-En nuestro caso, los resultados han sido:

·Tubo "D"=Aglutinación

·Tubo "C"=No aglutinación

·Tubo "E"=Aglutinación

·Tubo "c"=Aglutinación

·Tubo "e"=No aglutinación

Práctica 47: Determinación del grupo Rh en tubo.

Fecha: 5-5-15

Determinación del grupo Rh en tubo.

Introducción:

- Igual que en la prueba en portaobjetos, intentamos poner de manifiesto la presencia de antígeno D en la superficie de los hematíes mediante su enfrentamiento a un suero anti-D.

Material:

-Tubos de hemólisis.

-Rotulador de vidrio.

-Visualizador luminoso.

-Gradilla.

-Pipetas pasteur.

-Vasos de precipitados para desechar.

-Centrífuga.

-Pipeta graduada.

-Papel parafilm.

Reactivos:

-Suero anti-D.

-Albúmina bovina al 30%.

-Solución salina fisiológica al 0,9%.

Muestra:

-Hematíes problema preparados en suspensión al 5% (Pincha aqui para saber como se preparan)

Fundamento:

-La técnica esta basada en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema, empleado como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti-D. En el caso de que los hematíes contengan el antígeno D se producirá una aglutinación que puede observarse a simple vista.

Procedimiento:

1. Preparar la muestra, esto se hace mezclando sangre problema con suero salino a partes iguales, centrifugar a 2000rpm durante cuatro minutos, desechamos el sobrenadante y depositamos suero fisiológico a la misma cantidad de hematíes concentrados, esto se realizar hasta completar tres centrifugados.

2. En un tubo de ensayo depositamos 5ml de suero fisiológico y cinco gotas del concentrado de hematíes, homogenizar y ya tenemos la muestra preparada.

3. Rotulamos dos tubos, un con una "D" y otro con una "A".

4. En el tubo D añadimos una gota de suero anti-D y en el tubo A añadimos una gota de albúmina bovina.

5. A cada tubo le añadimos una gota de la suspensión de hematíes al 5% y agitamos suavemente y tapamos con papel parafilm.

6. Centrifugamos a 1000rpm durante un minuto o 3500rpm durante 30 segundos.

7. Golpeamos suavemente el fondo de los tubos para despegar el botón hemático y observamos la presencia o no de aglutinación.

Lectura de los resultados:

-Si el tubo D presenta aglutinación y el tubo A no, decimos que es Rh positivo.

-Si no se produce aglutinación en ninguno de los dos, se procede a incubar ambos a 37ºC durante media hora y posteriormente centrifugamos a 1000rpm durante 1 minuto, se observa si existe aglutinación o no.

-En caso de persistir la negatividad cromprobaremos que el paciente no posee un Du (D debíl) mediante una prueba de Coombs indirecta.

-Si sigue siendo negativo, la muestra se tratará de Rh negativo.

Encuesta en clase respecto al grupo Rh.

Práctica 46: Determinación del grupo Rh en porta. (PLIX)(B4)

Fecha: 5-5-15

Determinación del grupo Rh en porta.

Introducción:

-Al igual que podemos determinar el grupo AB0, también podemos determinar el grupo Rh, tanto en porta como en tubo. En porta, la aglutinación se ve favorecida por la exposición al calor.

Material:

-Portaobjetos.

-Pipetas pasteur.

-Rotulador de vidrio.

-Palillos ajitadores.

-Visualizador luminoso.

-Lancetas.

-Gasas.

Reactivos:

-Alcohol.

-Suero anti-D.

-Albúmina bovina al 30%.

Muestra:

-Sangre capilar o sangre total anticoagulada.

Fundamento:

-La técnica esta basada en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema, empleado como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti-D. En el caso de que los hematíes contengan el antígeno D se producirá una aglutinación que puede observarse a simple vista.

Procedimiento:

1. Dividir el portaobjetos en dos seciones con el rotulador de vidrio, una zona será "S" de suero y la otra zona será "A" de albúmina.

2. Colocaremos una gota de sangre en cada zona y posteriormente dos gotas del suero anti-D en la zona "S" y, dos gotas de albúmina en la zona "A".

3. Mezclamos con un palillo distinto a cada zona.

4. Colocamos el porta sobre el visualizador luminoso y lo balanceamos para favorecer la mezcla.

5. Observar la presencia o no de aglutinación.

Lectura de los resultados: